Características dos alérgenos de ácaros da poeira doméstica no Sudeste e Leste Asiático com o efeito de práticas higiênicas

2.1 . Local de amostragem e seleção de domicílios

O diagrama esquemático do processo de recolha e tratamento de amostras nos cinco países é apresentado na Fig . Para uma caracterização comparativa dos HDMAs entre países, foram recrutados agregados familiares que não tinham recebido serviços de cuidados com colchões, mantendo um número semelhante de agregados familiares em cada um dos cinco países. Para a recolha de amostras de pó da cama, foram recrutados 29 agregados familiares na Indonésia, 25 na Malásia, 32 na Tailândia, 31 no Vietname e 29 na Coreia do Sul. Os agregados familiares em áreas urbanas foram seleccionados em todos os países. Para garantir a representatividade e comparabilidade dos dados entre diferentes regiões, foram selecionados os tipos de habitação mais comuns em cada país; os apartamentos foram recrutados na Coreia do Sul, enquanto os prédios sem apartamentos foram recrutados na Indonésia, Malásia, Tailândia e Vietnã. Foram excluídos os domicílios com animais de estimação e as amostras foram obtidas do leito primário de cada domicílio.

1. Baixar: Baixar imagem em alta resolução (282 KB)
2. Baixar: Baixe a imagem em tamanho real

Figura 1 . Diagrama esquemático do processo de coleta e tratamento de amostras. Os agregados familiares que não receberam o serviço de cuidados de colchão são referidos como agregados familiares não cuidados, enquanto os que o receberam são referidos como agregados familiares cuidados. Um total de 57 famílias cuidadas na Malásia e na Coreia do Sul foram adicionalmente recrutadas para analisar o impacto da prática higiénica na redução da HDMA. Entre as famílias cuidadas, 28 na Malásia e 29 na Coreia do Sul receberam serviços de cuidados no prazo de um mês, enquanto os restantes 29 e 28 os receberam há mais de dois meses.

Os agregados familiares foram classificados em duas categorias – especificamente, com base na presença ou ausência de serviços de cuidados de colchões. O serviço de tratamento de colchões, um serviço comercial prestado por profissional externo, abrange uma série de manejos de HDM, incluindo aspiração, aplicação de tratamento repelente HDM e esterilização ultravioleta do colchão. Um ciclo de serviço de cuidados com o colchão a cada quatro meses é recomendado pelo fornecedor. Neste estudo, os agregados familiares que não recebiam regularmente serviços de cuidados com colchões foram rotulados como “não cuidados”, enquanto aqueles que utilizavam estes serviços foram rotulados como “cuidados”. Nenhum dos agregados familiares na Indonésia, Tailândia e Vietname era regularmente gerido através de serviços de cuidados de colchões. Na Malásia e na Coreia do Sul, 57 agregados familiares de cada país que receberam serviços de cuidados com colchões foram adicionalmente recrutados para analisar o efeito da prática higiénica na redução do HDMA; entre eles, 28 na Malásia e 29 na Coreia do Sul receberam serviços de cuidados no prazo de um mês, enquanto os restantes 29 e 28 os receberam há mais de dois meses. Informações detalhadas sobre as características de habitação e cama dos países do Sudeste e Leste Asiático investigados neste estudo são apresentadas na Tabela S1 . As amostras foram coletadas em agosto de 2022 na Indonésia e no Vietnã, de agosto a setembro de 2022 na Tailândia, de novembro de 2022 a março de 2023 na Malásia e de agosto a outubro de 2022 na Coreia do Sul.

Durante a amostragem, os investigadores de campo registraram o tipo de colchão utilizado, o tipo de cobertura do colchão (camada superior), as características da moradia e os hábitos de limpeza. A umidade e a temperatura do quarto foram medidas no momento da amostragem de poeira.

2.2 . Coleta de amostras

As amostras de poeira foram coletadas com aspirador de pó (Samsung, VC33T3500LB, 1800 W). Um dedal de extração de celulose de 28 × 100 mm (ADVANTEC, Tokyo Roshi Kaisha, Ltd., JP) foi inserido na extremidade distal do tubo de extensão do aspirador e selado com uma junta de borracha O-ring. Uma ferramenta para fendas limpa foi colocada sobre a extremidade distal do tubo de extensão. Antes de cobrir o tubo de extensão após a amostragem, todas as ferramentas para fendas foram cuidadosamente lavadas com detergente e posteriormente limpas com etanol para evitar contaminação.

Pesquisadores treinados foram enviados a cada casa para coletar amostras de poeira da cama. Todas as superfícies dos colchões dos estrados e do travesseiro principal foram aspiradas por 2 min e 30 s. Após a amostragem, os dedais de celulose contendo o pó da cama foram lacrados em saco plástico zip-lock e armazenados em freezer a –20°C imediatamente, até o pré-tratamento. Cada amostra de pó foi peneirada através de uma malha de tamanho de poro de 425 µm e o peso do pó recuperado foi determinado. Cada amostra foi garantida para incluir amostras de poeira pesando pelo menos 0,01 g para análise HDMA. A poeira foi coletada em tubos individuais de microcentrífuga com tampa de rosca, cada um rotulado com o número de identificação da amostra, data e quantidade de poeira. O pó pré-tratado foi armazenado em um freezer a –20°C e enviado para a Coreia do Sul.

2.3 . Reagentes e análise instrumental

Aproximadamente 0,1 g de amostras de poeira foram transferidas para um tubo cônico, onde foram misturadas com 2 mL de PBS-T (15 mL/150 mL). Amostras de poeira abaixo do critério de peso de 0,004 g foram diluídas em 70 µL de solução tampão para obtenção do volume mínimo necessário para o experimento. As soluções amostrais foram bem misturadas à temperatura ambiente por agitação durante 2 h. Com uma centrífuga multiuso de alta velocidade (Centrifuge 1580 R; Labogene Inc., Daejeon, Coréia), as soluções foram centrifugadas a 3300 rpm por 45 min. Numa placa de 96 poços, os sobrenadantes foram filtrados e lavados duas vezes com solução tampão (15 mL/150 mL). Para atingir concentrações entre 0,098 e 50 ng/mL, os padrões de alérgenos (EPC-DF1 e EPC-DP1) foram diluídos com solução tampão de ensaio (3 mL/30 mL). Padrões de alérgenos diluídos foram injetados nas placas de 96 poços com os sobrenadantes e incubados por 1 h à temperatura ambiente.

As análises quantitativas de Der f1 e Der p1 foram realizadas por um leitor de microplacas (SpectraMax® ABS Microplate Reader, Molecular Devices LLC., San Jose, CA, EUA) com software SoftMax (SoftMax® Pro Software, Molecular Devices LLC., San Jose, CA, EUA). O leitor de microplacas foi operado à temperatura ambiente e o programa foi configurado para o modo de protocolo de ácaros. O tampão de lavagem foi utilizado para limpar três vezes as placas de 96 poços, após o que foram coradas com um corante azul fluorescente. Soluções de parada de 50 μL foram divididas em alíquotas nos poços e a placa foi colocada dentro do VersaMax™ ELISA. Com as tampas fechadas, as medições foram realizadas a uma densidade óptica (DO) de 450 nm. Para as concentrações mais altas, as leituras de DO foram definidas entre 1,2 e 3,5.

2.4 . Garantia de qualidade e controle de qualidade

Sete amostras de pico de matriz, em que a concentração mínima na faixa da curva de calibração foi adicionada a uma amostra regular, foram preparadas para determinar o desvio padrão (DP). Uma amostra em branco regular foi analisada três vezes para uma estimativa média e depois subtraída dos valores de cada uma das sete amostras de pico de matriz. Após a determinação do valor DP, o limite de detecção (LOD) foi calculado utilizando a seguinte fórmula: LOD = 3,143 (valor do teste t de Student com 98% de confiança) × DP. Verificou-se que o coeficiente R ² da curva de calibração excedeu 0,98. Os resultados dos testes que ficaram abaixo do limite de 0,98 foram excluídos e as amostras foram testadas novamente. A precisão de todos os resultados dos testes foi meticulosamente examinada através do seu coeficiente de variação (CV). Os CVs foram calculados com base nas diferenças de concentração entre os dois resultados experimentais replicados. Quaisquer análises com discrepâncias superiores a 20% foram testadas novamente.

2.5 . Cálculo e análise estatística

Como os perfis de concentração de HDMAs na poeira da cama foram distribuídos normalmente, a média geométrica (GM) e o desvio padrão geométrico (GSD) foram utilizados neste estudo. Valores abaixo do LOD foram substituídos por 1/√2 LOD. As concentrações de Der f1 e Der p1 (μg/g), a quantidade de poeira (g) e a massa de HDMAs (ng) foram analisadas estatisticamente. A massa de Der f1 e Der p1 foi uma variável criada para determinar as quantidades de alérgenos contidos na poeira coletada. O peso do pó peneirado foi medido e multiplicado pelas concentrações de Der f1 e Der p1 usando as seguintes fórmulas: i) Massa de Der f1 (μg) = concentração de Der f1 (μg/g) × massa de pó (g), ii) Massa Der p1 (μg) = concentração Der p1 (μg/g) × massa de poeira (g). Como as quantidades de HDMAs eram pequenas, foi utilizada a unidade ng. Para analisar as diferenças nos níveis de Der f1 e Der p1 entre diferentes países, foi realizado um teste de Kruskal-Wallis. Para analisar as diferenças entre os níveis de Der f1 e Der p1 em cada país e as diferenças nas práticas de higiene, foi realizado um teste de postos sinalizados de Wilcoxon. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o software Rex versão 3.3.1.1 (Rexsoft, Co. Ltd., Seul, KR). Um valor de p <0,05 foi considerado significativo.

3.1 . Ocorrência e concentrações de HDMAs na poeira da cama

Neste estudo, as taxas de detecção e concentrações de Der f1 e Der p1 variaram entre os países. Em particular, enquanto a Indonésia e a Malásia tiveram taxas de detecção semelhantes para ambos os HDMAs, o Der f1 foi detectado com mais frequência do que o Der p1 na Coreia do Sul, Tailândia e Vietname. As diferentes taxas de detecção de HDMAs nestes cinco países podem ter surgido de diferenças nas preferências dos ácaros em relação às condições geográficas e climáticas [25] . Der f1 prosperou em temperaturas <35°C e níveis de umidade relativa de 47–50%, e se adaptou bem à umidade flutuante [14] , [26] . No entanto, Der p1 foi relativamente propício para temperatura e umidade uniformes [15] . Zock et al. [27] sugeriram que uma redução significativa no Der p1 estava associada à baixa temperatura e umidade. A Indonésia e a Malásia, ambas próximas do equador, registam consistentemente temperaturas e humidade elevadas, com variações sazonais mínimas [18] . A Tailândia e o Vietname, embora próximos do equador, apresentam condições relativamente variáveis ​​do que a Indonésia e a Malásia. Um sistema de alta pressão centrado na região Mongólia-Sibéria pode gerar um gradiente de pressão, intensificando os ventos frios do nordeste no Sudeste Asiático [28] , [29] . Esses surtos de monções do nordeste trazem ar frio e seco para a Tailândia continental e o Vietnã. Por outro lado, a Coreia do Sul experimenta flutuações sazonais significativas em temperatura e umidade, o que poderia explicar parcialmente por que exibiu as taxas de detecção e níveis de HDMA mais baixos neste estudo [19] .

A discrepância nos níveis de HDMA entre este estudo e estudos anteriores pode dever-se à mudança nas percepções de higiene pessoal juntamente com as mudanças climáticas. Durante a pandemia da doença Coronavírus-2019 (COVID-19), a sensibilização do público para a limpeza diligente aumentou significativamente no Sudeste e Leste Asiático; entre os 2.574 participantes, 72,1% do Sudeste Asiático e 77,8% do Leste Asiático relataram limpar superfícies e objetos pelo menos mais de 50% do tempo [32] . As variações temporais nas práticas de saúde e nas percepções higiênicas podem ter afetado os níveis de HDMAs. Além disso, as condições ambientais propícias à sobrevivência dos HDM poderiam ter mudado. A tendência da temperatura de 2008 a 2022 apresentou inclinações para todos os países investigados neste estudo [19] , [33] . No entanto, as variações sazonais de temperatura e precipitação foram mais pronunciadas na Coreia do Sul, enquanto as dos países do Sudeste Asiático foram relativamente uniformes [19] , [33] . As diferenças temporais nos níveis de HDMA entre diferentes regiões destacam a natureza dinâmica dos alérgenos, potencialmente influenciadas pelas mudanças nos ambientes internos, nos climas regionais e nos hábitos de vida ao longo do tempo. No entanto, o impacto direto da evolução dos fatores climáticos ou residenciais relevantes não foi analisado neste estudo. Portanto, são necessárias atualizações futuras sobre a influência de fatores em evolução nos níveis de HDMA.

Embora quantidades relativamente pequenas de poeira (0,005 [1,9] g) tenham sido recolhidas em agregados familiares na Indonésia, a quantidade média de Der p1 foi a mais elevada entre os cinco países. Isto sugere uma maior possibilidade de riscos imediatos de sensibilização para os residentes, especialmente para as crianças vulneráveis; um estudo no Japão relatou associações significativamente positivas (Der p 1, odds ratio ajustado [aOR] Q4 vs Q1: 2,91 [intervalo de confiança de 95%: 2,09–4,05]) entre a exposição ao HDMA e a sensibilização [35] . Para indivíduos sensíveis, níveis elevados de HDMA podem representar um risco imediato maior, mesmo com uma pequena quantidade de poeira. Por outro lado, embora a quantidade média de Der p1 na Tailândia tenha sido inferior à de outros países do Sudeste Asiático, a quantidade de poeira (0,009 [2,2] g) foi a mais elevada. Mesmo com pequenas quantidades de alérgenos, grandes quantidades de poeira podem afetar indivíduos sintomáticos com baixos limiares de sensibilização; um estudo anterior relatou menor limiar de ativação de basófilos (3,33 ng/mL vs 33,3 ng/mL) entre pacientes sintomáticos em comparação com pacientes assintomáticos [36] . Tanto as quantidades de poeira quanto de HDMAs foram maiores no Vietnã do que nos outros países deste estudo, indicando uma maior possibilidade de aumento do risco de sensibilização para os residentes [35] , [36] . A quantidade total de alergénios e poeiras reflecte a carga global de substâncias tóxicas no ambiente, enquanto a concentração de HDMA indica a gravidade potencial da exposição a alergénios resultante da ingestão de poeiras. Estes resultados destacam a necessidade de desenvolver abordagens específicas da região para mitigar alergénios e poeiras, bem como compreender os potenciais impactos destes alergénios na saúde nos respectivos países.

3.2 . Concentrações de HDMA por práticas higiênicas

O impacto dos serviços de cuidados com colchões nos níveis de HDMA na Malásia e na Coreia do Sul é mostrado na Fig . Na Malásia, os níveis de HDMA foram significativamente mais elevados em famílias não cuidadas (0,31 [2,6] µg/ge 0,76 [3,6] µg/g para Der f1 e Der p1, respectivamente) do que em famílias cuidadas (0,09 [2,6] µg/ g e 0,23 [4,1] µg/g para Der f1 e Der p1, respectivamente). Na Coreia do Sul, a concentração média de Der f1 foi maior em famílias não cuidadas do que em famílias cuidadas (0,118 [4,18] µg/g e 0,073 [3,4] µg/g, respectivamente), enquanto o oposto foi verdadeiro para Der p1 (0,012 [1,7] µg/g e 0,013 [1,8] µg/g, respectivamente). No entanto, as diferenças entre os agregados familiares cuidados e não cuidados na Coreia do Sul foram insignificantes tanto para Der f1 ( p = 0,787) como para Der p1 ( p = 0,549). Tanto na Malásia como na Coreia do Sul, os agregados familiares que receberam serviços de cuidados de colchão no prazo de um mês apresentaram níveis mais baixos de ambos os HDMAs do que aqueles que os receberam há mais de dois meses. Os níveis mais baixos de HDMAs em famílias cuidadas foram semelhantes a um estudo anterior, que observou uma diminuição significativa nos níveis de alérgenos através de atividades de limpeza frequentes [8] . No entanto, embora insignificante, a concentração média de Der p1 na Coreia do Sul foi maior nos agregados familiares cuidados do que nos agregados familiares não cuidados. Isto pode dever-se à influência de um único agregado familiar com um nível de Der p1 notavelmente elevado. A taxa de detecção de Der p1 foi de 7% em domicílios cuidados e não cuidados. Embora todos os agregados familiares não cuidados apresentassem níveis de Der p1 <0,026 µg/g, num agregado familiar cuidado era de 0,422 µg/g. Isto sublinha a necessidade de uma população de estudo maior no futuro para garantir robustez e generalização dos resultados.

1. Baixar: Baixar imagem em alta resolução (171 KB)
2. Baixar: Baixe a imagem em tamanho real

Figura 2 . Box plots comparando as concentrações de HDMA pela presença ou ausência de serviços de tratamento de colchões. A) é a concentração de Der f1 na Coreia do Sul. B) e C) são concentrações de Der f1 e Der p1 na Malásia, respectivamente.

Neste estudo, a concentração média de HDMAs totais em domicílios malaios não cuidados foi de 1.470 (2,4) µg/g, o que excedeu metade do limite mínimo de sensibilização de HDMA (2,0 µg/g) [25] . Pelo contrário, os agregados familiares assistidos apresentaram uma concentração de 0,512 (2,5) µg/g. Na Malásia e na Coreia do Sul, 60% e 17% das famílias não cuidadas ultrapassaram o limiar de sensibilização. No entanto, as taxas de famílias cuidadas diminuíram para 35% na Malásia e 10% na Coreia do Sul. Níveis mais baixos de HDMA em agregados familiares que recebem serviços de cuidados de colchões indicam a importância de práticas regulares de higiene. Um estudo anterior sugeriu que a limpeza frequente poderia ser um método eficiente de remoção de poeira [37] . Além disso, um estudo na Coreia do Sul encontrou uma diminuição significativa nos níveis de HDMA após ventilação, aspiração e limpeza [8] . Notavelmente, a exposição aos HDMAs pode afetar significativamente pacientes sensibilizados [1] . As crianças podem ser particularmente susceptíveis à sensibilização por HDMA, com reacções que variam desde respostas alérgicas ligeiras a reacções anafilácticas. Portanto, medidas adequadas devem ser adotadas para reduzir os níveis de HDMA no pó da cama.